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大鼠ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響₪▩▩│◕,即加標本和加酶結合物後│◕╃。抗原抗體反響的完結需求有一定的溫度和時刻₪▩▩│◕,這一保溫程序稱為溫育₪▩▩│◕,有人稱之為孵育₪▩▩│◕,在大鼠ELISA試劑盒中似不恰當│◕╃。
1•◕•、為什麼ELISA反響總是需求一定時刻的溫育·₪╃•?
ELISA屬固相免疫測定₪▩▩│◕,抗原•◕•、抗體的結合只在固相表面上發生│◕╃。以抗體包被的夾心法為例₪▩▩│◕,加入板孔中的標本₪▩▩│◕,其間的抗原並不是都有平等的和固相抗結合的時機₪▩▩│◕,只有貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸│◕╃。這是一個逐步平衡的程序₪▩▩│◕,因而需經擴散才能到達反響的結尾│◕╃。在這以後加入的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此│◕╃。
2•◕•、溫育常選用的溫度有43℃•◕•、37℃•◕•、室溫和4℃等│◕╃。
37℃是實驗室中常用的保溫溫度₪▩▩│◕,也是大多數抗原抗體結合的適宜溫度│◕╃。在建立ELISA方法作反響動力學研究時₪▩▩│◕,實驗表明₪▩▩│◕,兩次抗原抗體反響一般在37℃經1~2小時₪▩▩│◕,產品的生成可達高峰│◕╃。為加快反響₪▩▩│◕,可進步反響的溫度₪▩▩│◕,有些實驗在43℃進行₪▩▩│◕,但不宜選用更高的溫度│◕╃。抗原抗體反響4℃更為*₪▩▩│◕,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中過夜₪▩▩│◕,以構成最多的沉澱│◕╃。但因所需時刻太長₪▩▩│◕,在大鼠ELISA試劑盒中一般不予選用│◕╃。
大鼠ELISA試劑盒保溫的方式除有的ELISA儀器附有特製的電熱塊外₪▩▩│◕,一般均選用水浴₪▩▩│◕,可將大鼠ELISA試劑盒板置於水浴箱中₪▩▩│◕,ELISA板底應貼著水面₪▩▩│◕,使溫度敏捷平衡│◕╃。為防止蒸騰₪▩▩│◕,板上應加蓋₪▩▩│◕,也可用塑膠貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔₪▩▩│◕,此時可讓反響板漂浮在水面上│◕╃。若用保溫箱₪▩▩│◕,大鼠ELISA試劑盒應放在溼盒內₪▩▩│◕,溼盒要選用傳熱性良好的資料如金屬等₪▩▩│◕,在盒底墊溼的紗布₪▩▩│◕,後將ELISA板放在溼紗布上│◕╃。溼盒應先放在保溫箱中預溫至規則的溫度₪▩▩│◕,特別是在氣溫較低的時候更應如此│◕╃。