分享▩↟☁▩·！我們是怎麼操作人白介素ELISA試劑盒的

　　人白介素ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人白介素水平•◕•╃。用純化的人白介素抗體包被微孔板☁◕，製成固相抗體☁◕，往包被單抗的微孔中依次加入白介素☁◕，再與HRP標記的白介素抗體結合☁◕，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物☁◕，經過洗滌後加底物TMB顯色•◕•╃。

 

　　人白介素ELISA試劑盒的操作步驟•☁╃◕↟：

　　1✘₪☁、標準品的稀釋與加樣•☁╃◕↟：在酶標包被板上設標準品孔10孔☁◕，在第一✘₪☁、第二孔中分別加標準品100μl☁◕，然後在第一✘₪☁、第二孔中加標準品稀釋液50μl☁◕，混勻；然後從第一孔✘₪☁、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔☁◕，再在第三✘₪☁、第四孔分別加標準品稀釋液50μl☁◕，混勻；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉☁◕，再各取50μl分別加到第五✘₪☁、第六孔中☁◕，再在第五✘₪☁、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul☁◕，混勻；混勻後從第五✘₪☁、第六孔中各取50μl分別加到第七✘₪☁、第八孔中☁◕，再在第七✘₪☁、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl☁◕，混勻後從第七✘₪☁、第八孔中分別取50μl加到第九✘₪☁、第十孔中☁◕，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl☁◕，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉•◕•╃。（稀釋後各孔加樣量都為50μl☁◕，濃度分別為180 ng/L☁◕，120 ng/L ☁◕，60 ng/L☁◕，30 ng/L☁◕，15 ng/L）•◕•╃。

　　2✘₪☁、加樣•☁╃◕↟：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑☁◕，其餘各步操作相同)✘₪☁、待測樣品孔•◕•╃。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl☁◕，然後再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)•◕•╃。加樣將樣品加於酶標板孔底部☁◕，儘量不觸及孔壁☁◕，輕輕晃動混勻•◕•╃。

　　3✘₪☁、溫育•☁╃◕↟：用封板膜封板後置38℃溫育30分鐘•◕•╃。

　　4✘₪☁、配液•☁╃◕↟：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用•◕•╃。

　　5✘₪☁、洗滌•☁╃◕↟：小心揭掉封板膜☁◕，棄去液體☁◕，甩幹☁◕，每孔加滿洗滌液☁◕，靜置30秒後棄去☁◕，如此重複5次☁◕，拍幹•◕•╃。

　　6✘₪☁、加酶•☁╃◕↟：每孔加入酶標試劑50μl☁◕，空白孔除外•◕•╃。

　　7✘₪☁、溫育•☁╃◕↟：操作同3•◕•╃。

　　8✘₪☁、洗滌•☁╃◕↟：操作同5•◕•╃。

　　9✘₪☁、顯色•☁╃◕↟：每孔先加入顯色劑A50μl☁◕，再加入顯色劑B50μl☁◕，輕輕震盪混勻☁◕，37℃避光顯色15分鐘•◕•╃。

　　10✘₪☁、終止•☁╃◕↟：每孔加終止液50μl☁◕，終止反應(此時藍色立轉黃色)•◕•╃。

　　11✘₪☁、測定•☁╃◕↟：以空白空調零☁◕，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)•◕•╃。 測定應在加終止液後15分鐘以內進行•◕•╃。