人白介素ELISA試劑盒樣本處理及要求

　　人白介素ELISA試劑盒的實驗原理是用純化的抗體包被微孔板☁₪◕✘，製成固相載體☁₪◕✘，往包被抗該指標抗體的微孔中依次加入標本或標準品✘☁│、生物素化的抗該指標抗體✘☁│、HRP標記的親和素☁₪◕✘，經過洗滌後用底物TMB顯色◕₪•│。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色☁₪◕✘，並在酸的作用下轉化成的黃色◕₪•│。顏色的深淺和樣品中的該指標呈正相關◕₪•│。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）☁₪◕✘，計算樣品濃度◕₪•│。

 

　　樣本處理及要求↟▩✘：

　　1✘☁│、血清↟▩✘：室溫血液自然凝固10-20分鐘☁₪◕✘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)◕₪•│。仔細收集上清☁₪◕✘，儲存過程中如出現沉澱☁₪◕✘，應再次離心◕₪•│。

　　2✘☁│、血漿↟▩✘：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑☁₪◕✘，混合10-20分鐘後☁₪◕✘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)◕₪•│。仔細收集上清☁₪◕✘，儲存過程中如有沉澱形成☁₪◕✘，應該再次離心◕₪•│。

　　3✘☁│、尿液↟▩✘：用無菌管收集☁₪◕✘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)◕₪•│。仔細收集上清☁₪◕✘，儲存過程中如有沉澱形成☁₪◕✘，應再次離心◕₪•│。胸腹水✘☁│、腦脊液參照實行◕₪•│。

　　4✘☁│、細胞培養上清↟▩✘：檢測分泌性的成份時☁₪◕✘，用無菌管收集◕₪•│。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)◕₪•│。仔細收集上清◕₪•│。檢測細胞內的成份時☁₪◕✘，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液☁₪◕✘，細胞濃度達到100萬/ml左右◕₪•│。透過反覆凍融☁₪◕✘，以使細胞破壞並放出細胞內成份◕₪•│。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)◕₪•│。仔細收集上清◕₪•│。儲存過程中如有沉澱形成☁₪◕✘，應再次離心◕₪•│。

　　5✘☁│、組織標本↟▩✘：切割標本後☁₪◕✘，稱取重量◕₪•│。加入一定量的PBS☁₪◕✘，PH7.4◕₪•│。用液氮迅速冷凍儲存備用◕₪•│。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度◕₪•│。加入一定量的PBS(PH7.4)☁₪◕✘，用手工或勻漿器將標本勻漿充分◕₪•│。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)◕₪•│。仔細收集上清◕₪•│。分裝後一份待檢測☁₪◕✘，其餘冷凍備用◕₪•│。

　　6✘☁│、標本採集後儘早進行提取☁₪◕✘，提取按相關文獻進行☁₪◕✘，提取後應儘快進行實驗◕₪•│。若不能馬上進行試驗☁₪◕✘，可將標本放於-20℃儲存☁₪◕✘，但應避免反覆凍融.

　　7✘☁│、不能檢測含NaN3的樣品☁₪◕✘，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性◕₪•│。