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詳情介紹
人免疫球蛋白ELISA試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA)│╃。已知待測物質濃度的標準品↟₪◕、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測│╃。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育│╃。洗滌後│₪◕◕，加入親和素標記過的HRP│╃。再經過溫育和洗滌│₪◕◕，去除未結合的酶結合物│₪◕◕，然後加入底物A↟₪◕、B│₪◕◕，和酶結合物同時作用│╃。產生顏色│╃。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關係│╃。
自備材料╃╃✘：
1↟₪◕、蒸餾水│╃。
2↟₪◕、加樣器╃╃✘：5ul↟₪◕、10ul↟₪◕、50ul↟₪◕、100ul↟₪◕、200ul↟₪◕、500ul↟₪◕、1000ul│╃。
3↟₪◕、振盪器及磁力攪拌器等│╃。
安全性╃╃✘：
1↟₪◕、避免直接接觸終止液和底物A↟₪◕、B│╃。一旦接觸到這些液體│₪◕◕，請儘快用水沖洗│╃。
2↟₪◕、實驗中不要吃喝↟₪◕、抽菸或使用化妝品│╃。
3↟₪◕、不要用嘴吸取試劑盒裡的任何成份│╃。
ELISA試劑盒操作注意事項╃╃✘：
1↟₪◕、試劑應按標籤說明書儲存│₪◕◕，使用前恢復到室溫│╃。稀稀過後的標準品應丟棄│₪◕◕，不可儲存│╃。
2↟₪◕、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中│₪◕◕，密封儲存│₪◕◕，以免變質│╃。
3↟₪◕、不用的其它試劑應包裝好或蓋好│╃。不同批號的試劑不要混用│╃。保質前使用│╃。
4↟₪◕、使用一次性的吸頭以免交叉汙染│₪◕◕，吸取終止液和底物A↟₪◕、B液時│₪◕◕，避免使用帶金屬部分的加樣器│╃。
5↟₪◕、使用乾淨的塑膠容器配置洗滌液│╃。使用前充分混勻試劑盒裡的各種成份及樣品│╃。
6↟₪◕、洗滌酶標板時應充分拍幹│₪◕◕，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水│╃。
7↟₪◕、底物A應揮發│₪◕◕，避免長時間開啟蓋子│╃。底物B對光敏感│₪◕◕，避免長時間暴露於光下│╃。避免用手接觸│₪◕◕，有毒│╃。實驗完成後應立即讀取OD值│╃。
8↟₪◕、加入試劑的順序應一致│₪◕◕，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣│╃。
9↟₪◕、按照說明書中標明的時間↟₪◕、加液的量及順序進行溫育操作│╃。
ELISA試劑盒樣品收集↟₪◕、處理及儲存方法╃╃✘：
1↟₪◕、血清-----操作過程中避免任何細胞刺激│╃。使用不含熱原和內毒素的試管│╃。收集血液後│₪◕◕，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離│╃。
2↟₪◕、血漿-----EDTA↟₪◕、檸檬酸鹽↟₪◕、肝素血漿可用於檢測│╃。1000×g離心30分鐘去除顆粒│╃。
3↟₪◕、細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物│╃。
4↟₪◕、組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎│╃。1000×g離心10分鐘│₪◕◕，取上清液│╃。
5↟₪◕、儲存------如果樣品不立即使用│₪◕◕，應將其分成小部分-70 ℃儲存│₪◕◕，避免反覆冷凍│╃。儘可能的不要使用溶血或高血脂血│╃。如果血清中大量顆粒│₪◕◕，檢測前先離心或過濾│╃。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍│╃。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍│╃。
人免疫球蛋白ELISA試劑盒的準備╃╃✘：
1↟₪◕、標準品╃╃✘：標準品的系列稀釋應在實驗時準備│₪◕◕，不能儲存│╃。稀釋前將標準品振盪混勻│╃。
2↟₪◕、洗滌緩衝液(50×)的稀釋╃╃✘：蒸餾水50倍稀釋│╃。
操作步驟╃╃✘：
1↟₪◕、使用前│₪◕◕，將所有試劑充分混勻│╃。不要使液體產生大量的泡沫│₪◕◕，以免加樣時加入大量的氣泡│₪◕◕，產生加樣上的誤差│╃。
2↟₪◕、根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數│╃。每個標準品和空白孔建議做復孔│╃。每個樣品根據自己的數量來定│₪◕◕，能使用復孔的儘量做復孔│╃。標本用標本稀釋液1╃╃✘：1稀釋後加入50ul於反應孔內│╃。
3↟₪◕、加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔↟₪◕、加入待測樣品50ul於反應孔內│╃。立即加入50ul的生物素標記的抗體│╃。蓋上膜板│₪◕◕，輕輕振盪混勻│₪◕◕，37℃溫育1小時│╃。
4↟₪◕、甩去孔內液體│₪◕◕，每孔加滿洗滌液│₪◕◕，振盪30秒│₪◕◕，甩去洗滌液│₪◕◕，用吸水紙拍幹│╃。重複此操作3次│╃。如果用洗板機洗滌│₪◕◕，洗滌次數增加一次│╃。
5↟₪◕、每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP│₪◕◕，輕輕振盪混勻│₪◕◕，37℃溫育30分鐘│╃。
6↟₪◕、甩去孔內液體│₪◕◕，每孔加滿洗滌液│₪◕◕，振盪30秒│₪◕◕，甩去洗滌液│₪◕◕，用吸水紙拍幹│╃。重複此操作3次│╃。如果用洗板機洗滌│₪◕◕，洗滌次數增加一次│╃。
7↟₪◕、每孔加入底物A↟₪◕、B各50ul│₪◕◕，輕輕振盪混勻│₪◕◕，37℃溫育10分鐘│╃。避免光照│╃。
8↟₪◕、取出酶標板│₪◕◕，迅速加入50ul終止液│₪◕◕，加入終止液後應立即測定結果│╃。
9↟₪◕、在450nm波長處測定各孔的OD值│╃。
人免疫球蛋白GFc段受體Ⅰ ELISA試劑盒試劑盒效能╃╃✘：
1↟₪◕、靈敏度╃╃✘：最小的檢測濃度小於1號標準品│╃。稀釋度的線性│╃。樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.990│╃。
2↟₪◕、特異性╃╃✘：不與其它細胞因子反應│╃。
3↟₪◕、重複性╃╃✘：板內↟₪◕、板間變異係數均小於10%│╃。
人免疫球蛋白GFc段受體Ⅰ ELISA試劑盒結果判斷與分析
1↟₪◕、儀器值╃╃✘：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值│╃。
2↟₪◕、以吸光度OD值為縱座標(Y)│₪◕◕，相應的待測物質標準品濃度為橫座標(X)│₪◕◕，做得相應的曲線│₪◕◕，樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度│╃。
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