人白細胞介素12;23 p40 ELISA酶聯免疫

人白細胞介素12;23 p40試劑盒試驗原理▩│₪：
人白細胞介素12;23 p40試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗（ELISA）.已知待測物質濃度的標準品╃₪、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測☁☁✘。先將待測物質和生物素標記的抗體同時溫育☁☁✘。洗滌後✘▩↟，加入親和素標記過的HRP☁☁✘。再經過溫育和洗滌✘▩↟，去除未結合的酶結合物✘▩↟，然後加入底物A╃₪、B✘▩↟，和酶結合物同時作用☁☁✘。產生顏色☁☁✘。顏色的深淺和樣品中待測物質的濃度呈比例關係☁☁✘。

人白細胞介素12;23 p40試劑盒試劑盒內容及其配製

人白細胞介素12;23 p40試劑盒自備材料
1）蒸餾水☁☁✘。
2）加樣器▩│₪：5ul╃₪、10ul╃₪、50ul╃₪、100ul╃₪、200ul╃₪、500ul╃₪、1000ul☁☁✘。
3）振盪器及磁力攪拌器等☁☁✘。

人白細胞介素12;23 p40試劑盒安全性
1）避免直接接觸終止液和底物A╃₪、B☁☁✘。一旦接觸到這些液體✘▩↟，請儘快用水沖洗☁☁✘。
2）實驗中不要吃喝╃₪、抽菸或使用化妝品☁☁✘。
3）不要用嘴吸取試劑盒裡的任何成份☁☁✘。

人白細胞介素12;23 p40試劑盒操作注意事項
1）試劑應按標籤說明書儲存✘▩↟，使用前恢復到室溫☁☁✘。稀稀過後的標準品應丟棄✘▩↟，不可儲存☁☁✘。
2）實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中✘▩↟，密封儲存✘▩↟，以免變質☁☁✘。
3）不用的其它試劑應包裝好或蓋好☁☁✘。不同批號的試劑不要混用☁☁✘。保質前使用☁☁✘。
4）使用一次性的吸頭以免交叉汙染✘▩↟，吸取終止液和底物A╃₪、B液時✘▩↟，避免使用帶金屬部分的加樣器☁☁✘。
5）使用乾淨的塑膠容器配置洗滌液☁☁✘。使用前充分混勻試劑盒裡的各種成份及樣品☁☁✘。
6）洗滌酶標板時應充分拍幹✘▩↟，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水☁☁✘。
7）底物A應揮發✘▩↟，避免長時間開啟蓋子☁☁✘。底物B對光敏感✘▩↟，避免長時間暴露於光下☁☁✘。避免用手接觸✘▩↟，有毒☁☁✘。實驗完成後應立即讀取OD值☁☁✘。
8）加入試劑的順序應一致✘▩↟，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣☁☁✘。
9）按照說明書中標明的時間╃₪、加液的量及順序進行溫育操作☁☁✘。

人白細胞介素12;23 p40試劑盒樣品收集╃₪、處理及儲存方法
1）血清-----操作過程中避免任何細胞刺激☁☁✘。使用不含熱原和內毒素的試管☁☁✘。收集血液後✘▩↟，1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離☁☁✘。
2）血漿-----EDTA╃₪、檸檬酸鹽╃₪、肝素血漿可用於檢測☁☁✘。1000×g離心30分鐘去除顆粒☁☁✘。
3）細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物☁☁✘。
4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎☁☁✘。1000×g離心10分鐘✘▩↟，取上清液
5）儲存------如果樣品不立即使用✘▩↟，應將其分成小部分-70 ℃儲存✘▩↟，避免反覆冷凍☁☁✘。儘可能的不要使用溶血或高血脂血☁☁✘。如果血清中大量顆粒✘▩↟，檢測前先離心或過濾☁☁✘。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍☁☁✘。應在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍☁☁✘。

人白細胞介素12;23 p40試劑盒試劑的準備
1）標準品▩│₪：標準品的系列稀釋應在實驗時準備✘▩↟，不能儲存☁☁✘。稀釋前將標準品振盪混勻☁☁✘。
2）洗滌緩衝液（50×）的稀釋▩│₪：蒸餾水50倍稀釋☁☁✘。

人白細胞介素12;23 p40試劑盒操作步驟
1）使用前✘▩↟，將所有試劑充分混勻☁☁✘。不要使液體產生大量的泡沫✘▩↟，以免加樣時加入大量的氣泡✘▩↟，產生加樣上的誤差☁☁✘。
2）根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數☁☁✘。每個標準品和空白孔建議做復孔☁☁✘。每個樣品根據自己的數量來定✘▩↟，能使用復孔的儘量做復孔☁☁✘。標本用標本稀釋液1▩│₪：1稀釋後加入50ul於反應孔內☁☁✘。
3）加入稀釋好後的標準品50ul於反應孔╃₪、加入待測樣品50ul於反應孔內☁☁✘。立即加入50ul的生物素標記的抗體☁☁✘。蓋上膜板✘▩↟，輕輕振盪混勻✘▩↟，37℃溫育1小時☁☁✘。
4）甩去孔內液體✘▩↟，每孔加滿洗滌液✘▩↟，振盪30秒✘▩↟，甩去洗滌液✘▩↟，用吸水紙拍幹☁☁✘。重複此操作3次☁☁✘。如果用洗板機洗滌✘▩↟，洗滌次數增加一次☁☁✘。
5）每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP✘▩↟，輕輕振盪混勻✘▩↟，37℃溫育30分鐘☁☁✘。
6）甩去孔內液體✘▩↟，每孔加滿洗滌液✘▩↟，振盪30秒✘▩↟，甩去洗滌液✘▩↟，用吸水紙拍幹☁☁✘。重複此操作3次☁☁✘。如果用洗板機洗滌✘▩↟，洗滌次數增加一次☁☁✘。
7）每孔加入底物A╃₪、B各50ul✘▩↟，輕輕振盪混勻✘▩↟，37℃溫育10分鐘☁☁✘。避免光照☁☁✘。
8）取出酶標板✘▩↟，迅速加入50ul終止液✘▩↟，加入終止液後應立即測定結果☁☁✘。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值☁☁✘。

人白細胞介素12;23 p40試劑盒侷限
6號標準品以上的結果為非線性的✘▩↟，根據此標準曲線無法得到精確的結果☁☁✘。

人白細胞介素12;23 p40試劑盒試劑盒效能
1. 靈敏度▩│₪：最小的檢測濃度小於1號標準品☁☁✘。稀釋度的線性☁☁✘。樣品線性迴歸與預期濃度相關係數R值為0.990☁☁✘。
2. 特異性▩│₪：不與其它細胞因子反應☁☁✘。
3. 重複性▩│₪：板內╃₪、板間變異係數均小於10%☁☁✘。

人白細胞介素12;23 p40試劑盒結果判斷與分析
1╃₪、儀器值▩│₪：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2╃₪、以吸光度OD值為縱座標（Y）✘▩↟，相應的待測物質標準品濃度為橫座標（X）✘▩↟，做得相應的曲線✘▩↟，樣品的待測物質含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度☁☁✘。